本文摘要：海綿中含有豐富的生物活性物質。海綿(Marine sponge) 是屬于動物界、海綿動物門(spongia)的一類低等多細胞海洋生物。小編介紹一篇關于海綿動物的一篇論文。 摘要： 本論文樣品采集地于湛江近海海域，利用有機溶劑石油醚，三氯甲烷，正丁醇和乙酸乙酯提取海綿
海綿中含有豐富的生物活性物質。海綿(Marine sponge) 是屬于動物界、海綿動物門(spongia)的一類低等多細胞海洋生物。小編介紹一篇關于海綿動物的一篇論文。
摘要： 本論文樣品采集地于湛江近海海域，利用有機溶劑石油醚，三氯甲烷，正丁醇和乙酸乙酯提取海綿中的化學成分，用凝膠色譜(GPC)，氣相—質譜聯用儀(GC/MS)，高效液相和液質聯用儀等光譜技術進行鑒定，分析海綿含有的化學成分。實驗結果表明，此次采摘的海綿中含有多種化合物，并確實了其中Hexanedioic acid bis(2-ethyLhexyL) ester、 n-Hexadecanoic acid、 1,3-CycLopentanedione、2,4-dimethyL-，1,2-DithioLane-3-pentanoic acid Tetradecanoic acid五種化合物，26種化合物的分子量，但還有多種物質還有待進一步分析。
關鍵詞： 海綿;分離提純;化學成分
0引言
從海水、海底沉積土到海洋動植物,以及一些熱泉涌、水熱狹縫等,包羅萬象的生態圈,造就了海綿共附生微生物一個復雜多樣的群體,同時,產生了獨特的有別于陸地微生物的多種具有生物活性的次級代謝產物。本研究利用海南豐富的海綿資源，從中篩選出化合物，通過色譜、光譜分析技術鑒定其結構特征，并分析其生物活性。有望篩選出結構與活性不同于其他海洋來源的化合物，為進一步開發新的海洋藥物提供生物資源，具有非常重要的意義。
1材料方法
1.1 材料樣品采集地：湛江近海海域。樣品處理：從海水中采摘健康的海綿樣品后，分別置于無菌塑料袋中，一般在2h內送回實驗室處理，不能及時送回實驗室的則放于冰盒內低溫短時間保存。
1.2 試劑與儀器
三氯甲烷分析醇廣州化學試劑廠產品
正丁醇分析醇廣州化學試劑廠產品
乙酸乙酯分析醇廣州化學試劑廠產品
石油醚分析醇天津市福晨化學試劑廠產品
10mL移液槍
HP6890/5973MSD 氣相色譜—質譜聯用儀
HPLC高效液相儀/氨基酸分析儀(Water 2487 duaLλ absorbance detector)
agiLent 1100-esquire hct液質聯用儀
GPC凝膠滲透色譜儀(分子量測試范圍：150—270，000)
真空干燥箱DZX—3型(6020B)寧波海曙賽福實驗儀器廠
1.3 實驗方法
1.3.1 化合物的提取分離海綿用無菌海水浸洗3遍，然后擠干，以去除表面附著物及夾帶的海水微生物。用無菌剪刀進行解剖，用2mL 甘油保存。實驗時，用5mL 95%工業酒精浸取3次，每次24小時。提取物冷凍干燥成白色粉末后，將濃縮物分散于5mL水中，再用各2mL，1.5mL，1.5mL石油醚分別提取三次，得可溶物5mL，再用極性逐漸增大的三氯甲烷，正丁醇，乙酸已脂以同樣的方法提取三次，各得可溶物5mL，提取余相水溶物5mL。
1.3.2 氣相—質譜聯用儀測定有機相分別取200μL用于氣相—質譜連用儀(GC/MS)進行測定分析。色譜條件為： 色譜柱 HP-FFAP(30m×0.25mm, 0.25μm),60°C ，4°C/min→150°C， 6°C/min，250°C，進樣溫度 250°C，載氣 He，分流比 80：1，柱流量 1.0μm/min;質譜條件為：EI源，電離電壓 70ev，離子源溫度 230°C，掃描范圍 40-500aum，進氣量 1μL。
1.3.3 高效液相色譜測定有機相冷凍干燥后用于高效液相及液質聯用儀進行測定分析。高效液相分析儀條件為：分離系統：WATERS 2695 separations moduLe，色譜柱：Waters C-18(3×15mm)，柱溫：25±5℃，流動相：甲醇，水梯度洗脫，洗脫條件如表1。
檢 測 器：Waters 2487 duaL λ absorbance detector，檢測波長： 254nm，進樣量：6μL，控制系統：Waters empower 軟件。供試品溶液配制：正丁醇萃取液中加入800μL甲醇，三氯甲烷提取物、石油醚提取物以及乙酸乙酯提取物中加入1.3mL甲醇，混勻后以12000轉的轉速離心15min。取上層溶液待分析用。
1.3.4 液質聯用儀測定液質聯用儀分析條件為：儀器型號為agiLent 1100-esquire hct，色譜柱C18，內徑4.60*300mm，流動相甲醇+水梯度洗滌，洗脫條件如表2。
對水溶物做凝膠色譜分析，GPC的條件為：示差檢測器 Waters 1515+2414，兩根柱子串聯：型號分別是uLtrahydrogeLTM120和uLtrahydrogeLTM500，柱溫55℃，檢測器溫度50℃，流動相：水流速：0.6mL/min。
1.3.5 凝膠色譜測定柱子型號：UltrahydrogelTM500、UltrahydrogelTM120(分子量范圍100～40萬，雙柱串聯)。填料：葡聚糖。柱溫55℃。流動相：純水。流動相速度：0.6ml/min。Waters 泵1515，示差檢測器2414;檢測器50℃。
2結果分析
2.1 氣相—質譜聯用儀(GC/MS )結果及分析①正丁醇提取液分析(圖1)。結果顯示正丁醇提取液中含有4種化合物： a)出峰時間在36.02處有一個化合物：結構為：Hexanedioic acid, bis(2-ethyLhexyL) ester，分子量：370.31，分子式：C22H42O4。b)出峰時間在36.90處有一個化合物：結構為：n-Hexadecanoic acid，分子量：256.24，分子式：C16H32O2。c)出峰時間在39.68處有一個化合物：結構為：1，3-CycLopentanedione，2，4-dimethyL-，分子量：126.07，分子式：C7H10O2。d)出峰時間在40.73處有一個化合物：結構為：1，2-DithioLane-3-pentanoic acid，分子量：206.04，分子式：C8H14O2S2。②石油醚提取液分析(圖2)。結果顯示石油醚提取液中含有1種化合物：Tetradecanoic acid。分子量：228.21，分子式：C14H28O2。
2.2 高效液相結果及分析:( 圖均已積分)①正丁醇提取液分析(圖3)。②石油醚提取液分析(圖4)。③三氯甲烷提取液分析(圖5)。④乙酸乙酯提取液分析(圖6)。
2.3 液質聯用儀結果分析①正丁醇提取液分析(圖7、8)。分析結果有八個化合物存在，并占有一定含量。其中以6號化合物感應強度最大，且在一級質譜圖中可以明顯確定其分子量為565.6(MS m/s:566.6(M+);588.6(M+Na)，見圖9和圖10)。和背景化合物比較,可以確定為新的化合物。其他化合物由于現有條件無法做出更深一步的判斷，待以后深入研究。同時，實驗中曾改變紫外波長為210進行比較分析，但是最后由于波長210下的色譜和質譜比較重合性較差，所以選擇波長外280的實驗結果。但波長210下的分析數據可供參考，為以后進一步研究做參考。見圖11。②乙酸乙酯提取液分析(圖12、13)。分析結果有四個比較明顯的化合物存在，并占有一定含量。但化合物由于現有條件無法做出更深一步的判斷，待以后深入研究。它們的質譜圖如圖14-17。
2.4 凝膠色譜結果及分析(圖18-20)分析結果表明：水相中化合物有兩大類，分子量大概在10，000左右和小于100的化合物存在，并占有相當大含量。但由于現有條件無法做出更深一步的判斷，待以后深入研究。
以下為凝膠色譜的標準圖如圖21：
分子量分別為：277000、12900、1460、106。
3討論與小結
本論文的研究工作主要取得以下結果：①以海綿為分離樣品，采用多種分離技術分離得到多種化合物。結果表明，石油醚，三氯甲烷，正丁醇，乙酸乙酯分別能提取到有機化合物，而水相中也能得到化合物。②以氣相—質譜聯用儀分析技術分離得到Hexanedioic acid、bis(2-ethyLhexyL)ester、n-Hexadecanoic acid、1,3-CycLopentanedione、2,4-dimethyL-，1,2-DithioLane-3-pentanoic acid5種化合物。③石油醚，三氯甲烷，正丁醇，乙酸乙酯提取液經高效液相技術分離共得到26種化合物。其中有些物質是重復的，說明很多化合物可能是同時溶于有機相或同時溶于其中某幾項。同時也說明有些化合物的性能或結構是非常相似，在一定程度上比較難以分離，需改進技術或改變方法來進行深一步的研究試驗。④以液質聯用儀分離技術分離得到12個不同分子量的化合物。其中以分子量為565. 6(MS m/s:566.6(M+);588.6(M+Na))的化合物可以確定為新化合物，因為在色譜庫和相關文獻中都沒提及過該分子量的化合物。以后的研究工作將以此化合物為重點進行研究，相信通過更深入的分析鑒定，能確定該化合物的結果和特征。⑤以凝膠色譜分析技術得到溶于水相中的化合物有兩大類，分子量大約在10，000Da左右和小于100Da，兩者都有相當高含量。根據現有條件，估計分子量小于100的化合物中可能有海綿中的一些小分子的酸和堿等化合物，當然也可能是實驗的誤差，使一些甘油未除盡，所以還有點甘油存在;而分子量在10，000左右的化合物很可能是一些不易溶于以上4種有機溶劑的高分子聚合物，當然也有可能是提純過程中留下的極小部分的細胞碎片。⑥本研究利用該領域還未有人用氣質聯用儀，液質聯用儀技術來互補分析海綿中的有機物成分，通過對有機相和無機相的分析，對海綿中的化合物分離提取是比較全面的。但是由于客觀條件的限制，目前的研究結果中仍存在有未確定的化合物，例如水相中分子量在10，000左右的化合物和質譜中有顯示而色譜中未能查到的化合物，及質譜中一些含量不高的小峰所代表的化合物作更深入的研究奠定了一定的基礎。
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閱讀范文：房產期刊投稿論中國小產權房問題
這篇房產期刊投稿發表了中國小產權房問題，小產權房指的是在農民集體所有土地上建設銷售的房屋，不是法律上的概念，而是一種不成文的約定，論文介紹了小產權房的分類和相關政策，探討了小產權房興起的原因。
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