本文摘要：【摘要】 目的：通過硝酸鎵對卵巢癌HO-8910細胞作用，分析誘導凋亡中對Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表達的情況。方法：通過對卵巢癌HO-8910細胞培養及干預，Western印跡檢測Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表達。結果：硝酸鎵組、順鉑組及聯合治療組HO-8910細胞Bcl-
【摘要】 目的：通過硝酸鎵對卵巢癌HO-8910細胞作用，分析誘導凋亡中對Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表達的情況。方法：通過對卵巢癌HO-8910細胞培養及干預，Western印跡檢測Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表達。結果：硝酸鎵組、順鉑組及聯合治療組HO-8910細胞Bcl-2的水平明顯低于空白對照組，硝酸鎵組、聯合治療組Bax、Caspase-3的水平明顯高于空白對照組，比較差異有統計學意義(P<0.05)。結論：硝酸鎵對卵巢癌細胞的作用，可能與Bcl-2的表達水平下調，Bax、Caspase上調有關。
【關鍵詞】 硝酸鎵; 卵巢癌細胞; 蛋白表達
卵巢癌是婦科常見腫瘤之一，術后化療是常用方法，鎵是繼鉑金屬類藥物之后第二個用于腫瘤治療的藥物。雖然在骨質疏松方面有應用[1-5]，但在腫瘤方面尚未廣泛應用于臨床，國內外少見報道。本研究通過硝酸鎵、順鉑單藥及聯合用藥組分別以不同濃度體外作用卵巢癌HO-8910細胞，探討硝酸鎵作用機制，為腫瘤治療及制備抗腫瘤藥物提供新的途徑。
1 材料與方法
1.1 材料 硝酸鎵(Betapharma有限公司，上海，中國);順鉑注射液(齊魯制藥有限公司)。人卵巢癌HO-8910細胞株(中國醫學科學院腫瘤研究所)。
1.2 細胞培養 將卵巢癌HO-8910細胞株復蘇、傳代、培養，選擇對數生長期的細胞應用。
1.3 實驗分組 分成空白對照組、硝酸鎵組、順鉑組及硝酸鎵與順鉑聯合治療組。取處于對數生長期的細胞，0.25%胰酶消化制備成單細胞懸液，調整密度為1×105/mL，接種到96孔培養板中，每孔接種100 μL。
1.4 蛋白的表達檢測 Western印跡法：將空白對照組和處理組(終濃度為：10 μg/mL的硝酸鎵，
10 μg/mL的順鉑，5 μg硝酸鎵+10 μg順鉑/mL的聯合組作用72 h后，空白對照組加入RPMI 1640培養基，設3個復孔。)的細胞PBS清洗3次，加入裂解液(β巰基乙醇)，冰上冷卻后，12 000 rpm離心2 min，取上清液，以Bradford方法在595 nm波長下測定。SDS-PAGE凝膠電泳，轉膜切膠：根據實驗需要按照蛋白的分子量，以Marker為對照進行切膠。將切好的膠置于轉膠緩沖液中室溫搖晃平衡30 min。備膜：裁剪硝酸纖維素膜和濾紙，與膠的大小相當但略大。戴手套切濾紙和膜。將切好的硝酸纖維素膜置于甲醇中放置15 s，使之從不透明變透明，然后放入超純水中2 min，最后將處理好的硝酸纖維素膜放入轉膜緩沖液中平衡15 min。裝膜：將轉膜用的夾子打開使黑的一面(負極)保持水平。在上面墊一張海綿墊，用玻棒來回搟幾遍以搟走里面的氣泡。浸泡好的濾紙，隨后按照凝膠→硝酸纖維素膜→濾紙→海綿墊的順序依次疊放，注意每一層都不能有氣泡(如有氣泡可用玻璃棒輕輕搟壓)。最后將白色板(正極)蓋好裝入轉膜槽中。整個操作在轉移液中進行，要不斷的搟去氣泡。膜兩邊的濾紙不能相互接觸，接觸后會發生短路。轉膜：將夾子放入轉移槽槽中，要使夾的黑面對槽的黑面，夾的白面對槽的紅面。電轉移時會產熱，在槽的周圍放置冰來降溫。本實驗室使用220 mA轉膜2 h。轉完后將膜取下硝酸纖維素膜，標記一角。封閉(將膜用TBST中漂洗3次，每次5 min。漂洗后將硝酸纖維素膜放入加有BSA封閉液的平皿中，室溫下搖床2 h)。加一抗：將封閉后的硝酸纖維素膜放至含有TBST的洗缸中，搖床上漂洗3次，每次5 min。洗完后分別加入Bax抗體(1∶300)、Caspases-3(1∶150)、Bcl-2(1∶300)抗體及β-actin抗體(1∶1000)，放入平皿中在側擺搖床上，室溫低速孵育2 h;加二抗：回收一抗，將硝酸纖維素膜在TBST洗缸中室溫搖床漂洗3次，每次5 min，然后將漂洗過的硝酸纖維素膜放至加有辣根過氧化物酶標記的二抗(1∶800)的平皿中，室溫避光孵育1 h。孵育后將硝酸纖維素膜在TBST洗缸中漂洗3次，每次5 min;化學發光，顯影，定影;凝膠圖像分析，采用Image J軟件分析處理。
1.5 統計學處理 使用SPSS 19.0統計軟件進行分析，計量資料用(x±s)表示，兩組比較采用作獨立樣本t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。
2 結果
Western結果進行計算機圖像分析，見表1、圖1。硝酸鎵組、順鉑組及聯合治療組HO-8910細胞Bcl-2的水平明顯低于空白對照組;Bax、Caspase-3的水平硝酸鎵組、聯合治療組明顯高于空白對照組，比較差異有統計學意義(P<0.05)，而順鉑作用細胞Bax、Caspase表達變化不顯著。
3 討論
早期，人們將放射性鎵用于對腫瘤的定位及檢測腫瘤細胞生長代謝的活性。2004年美國FDA已審批硝酸鎵注射液作為non.Hodgkin的淋巴癌治療的Ⅱ期臨床。鎵是繼鉑金屬類藥物之后第二個用于腫瘤治療的藥物，但它比順鉑類藥物療效顯著且毒性小[6-9]，能有效地治療某些癌癥[10-11]。人們逐漸認識到鎵的化療作用遠遠超出鎵對腫瘤的定位。且相關藥物已經進入臨床研究。
目前認為鎵可能抗癌機制主要包括轉鐵蛋白受體途徑，研究發現在部分惡性淋巴瘤和膀胱癌中轉鐵蛋白受體表達增高，硝酸鎵對于這種類型的腫瘤的治療效果明顯可能是通過轉鐵蛋白受體途徑抑制了轉鐵蛋白受體的活性，阻止鐵進入細胞，致細胞內鐵缺乏而導致核糖核苷酸還原酶鐵依賴M2亞單位活性降低，抑制了細胞內相關基因的表達[12-13]。
小編推薦優秀的醫學期刊 中國針灸雜志征稿郵箱
《中國針灸》雜志為國家級大型綜合性針灸學術期刊，創刊于1981年8月，由中國科學技術協會主管，中國針灸學會、中國中醫科學院針灸研究所主辦，《中國針灸》編輯部編輯出版。國內外公開發行，為國際標準大16開，月刊，96頁，采用輕涂紙全彩色印刷。
轉載請注明來自發表學術論文網：http://www.cnzjbx.cn/yxlw/3143.html
